微生物鉴定中常用的生化反应 - 实验方法
酷尔生物 / 2021-08-30
一、 淀粉水解试验
1. 准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
2. 接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌
3. 培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。
4. 检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。
二、油脂水解试验
1. 将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。
2. 接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。
三、明胶液化试验
1. 接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。
2. 培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。
3. 观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。
四、石蕊牛乳试验
1. 接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。
2. 培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。
3. 结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。
五、甲基红试验(M.R.试验)
将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养 24h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。
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